高效液相色譜柱怎么裝柱

1. 色譜柱應(yīng)該是可以直接接在勻漿罐上的，如果不能，則需要一個(gè)轉(zhuǎn)換接頭。這個(gè)轉(zhuǎn)換接頭的尺寸很重要，既要能防止漏液，又要避免過(guò)硬或尺寸不合適而導(dǎo)致色譜柱接口螺紋的損壞；

2. 具體裝柱過(guò)程一般來(lái)說(shuō)是①先以合適的勻漿液（多為有機(jī)溶劑，劉國(guó)詮老師的《色譜柱技術(shù)》一書中列的比較全，可供參考）將填料充分分散（可以借助攪拌、超聲等方式）；②在填料勻漿的過(guò)程中，完成準(zhǔn)備工作，即把色譜柱接在勻漿罐的下端（色譜柱不接勻漿罐的一段要接好篩板和柱頭，確保擰緊但不能擰死以免損壞色譜柱），打開(kāi)勻漿罐上端和氣泵之間的接頭以便灌入勻漿液；③勻漿液罐好后，接好勻漿罐上端接頭，開(kāi)始加壓；④選擇合適的壓力，就可以把填料壓實(shí)了；⑤穩(wěn)定在適當(dāng)?shù)膲毫ι蠅阂欢〞r(shí)間后，卸掉壓力，卸下色譜柱，把接勻漿罐這一段的填料抹平，裝上篩板和柱頭即可使用。

3. 裝柱是個(gè)困難的過(guò)程，需要耐心摸索壓力、勻漿液體積等參數(shù)，才能確保柱床均勻密實(shí)，達(dá)到好的柱效和峰形。如果裝的不好，則可能出現(xiàn)柱效不夠，或拖尾等問(wèn)題。

 柱子使用

1、首先要確認(rèn)您所要分析的樣品流動(dòng)相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內(nèi)，以免損壞柱子硅膠！

2、接下來(lái)就是用你做樣品的流動(dòng)相去平衡柱子，如果您的流動(dòng)相中含有緩沖鹽溶液，在平衡柱子之前務(wù)必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去過(guò)渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml，250x4.6mm柱子約為45ml；下同)以上，再用帶鹽的流動(dòng)相去平衡柱子足夠的時(shí)間(直到基線非常平穩(wěn)為止)，之后方可進(jìn)樣分析。

3、無(wú)論您分析何種樣品，都會(huì)由于各種原因樣品中總有部分雜質(zhì)，因此建議您在進(jìn)樣前在柱子前端加接保護(hù)柱以保護(hù)您那昂貴的分析柱，或者用0.2um或 0.45um針頭過(guò)濾器過(guò)濾樣品后方進(jìn)樣分析！

高效液相色譜柱柱子清洗

分兩種情況進(jìn)行：

1、  如果您的樣品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流動(dòng)相(包括流動(dòng)相里面加了點(diǎn)酸)，在做完樣品后可直接用65％的乙腈/水或者純甲醇進(jìn)行清洗10倍柱體積即可保存(如果時(shí)間有限，可視情況在儀器能承受的范圍內(nèi)加快流速******為2ml/min)；

2、  如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對(duì)試劑的流動(dòng)相，在做完樣品后的清洗必須按照下列2個(gè)步驟進(jìn)行清洗柱子(不論您的柱子是否可以耐純水的極性柱子還是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步驟——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱體積溶劑以上，1~2ml/min(根據(jù)時(shí)間自由調(diào)節(jié)流速：如果因?yàn)闀r(shí)間來(lái)不及而清洗不了那么長(zhǎng)時(shí)間，可以適當(dāng)加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子應(yīng)以0.2~0.5ml/min的流速進(jìn)行)，